免疫組化技巧

1、做前防護(hù)：二甲苯有毒易揮發(fā)，二甲苯可以誘導(dǎo)白血病。必須在通風(fēng)廚中脫蠟和透明。

2、脫蠟前將石蠟切片放入 60 度烘箱中烘烤 2 個(gè)小時(shí)，有助于脫蠟，并可以防脫片。

3、提高溫度有助于二甲苯脫蠟，冬天時(shí)，可將二甲苯先放入 37°孵箱中保溫，再進(jìn)行脫蠟，提高脫蠟效果。

4、脫蠟過(guò)程，最后一步二甲苯應(yīng)盡量保持新鮮二甲苯，同時(shí)將上次的二甲苯依次往前一個(gè)二甲苯中更換，因?yàn)樽钋暗亩妆绞鞘灇埩糇疃?，越往后的二甲苯中石蠟越少?/p>

5、水化過(guò)程，最后的一個(gè)乙醇也應(yīng)該勤換，同理，最后一個(gè)乙醇中的二甲苯最少。6、消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶建議用 3% H2O2（甲醇 90ml+H2O2 10ml）（PS：H2O2 原濃度是 30%的，變成 3%應(yīng) 10 倍稀釋?zhuān)? 甲醇具有固定作用，有助于保護(hù)組織。

7、抗原修復(fù)，0.01M 檸檬酸鈉緩沖液（PH 6.0），建議使用高壓鍋來(lái)抗原修復(fù)，高壓鍋溫度較為穩(wěn)定，微波爐抗原修復(fù)火候控制不穩(wěn)定，導(dǎo)致修復(fù)液經(jīng)常沸騰時(shí)易引起脫片。

8、封閉前，建議使用免疫組化筆將組織部分畫(huà)圈，防止抗體流出片子。很好用的，不過(guò)500個(gè)大洋哦。

9、DAB 顯色程度把握，在目的組織處，顯現(xiàn)出黃色或者棕色顆粒狀時(shí)，而組織邊緣尚還未顯色時(shí)，終止顯色。簡(jiǎn)而言之，在邊緣效應(yīng)出現(xiàn)前，而目的蛋白顯色出來(lái)時(shí)終止最佳。

10、封片前，脫水步驟即為水化的反方向操作，注意事項(xiàng)同理。

11、免疫組化拍照時(shí)，高倍鏡下視野模糊，無(wú)論如何調(diào)節(jié)顯微鏡焦距都無(wú)法清晰時(shí)，考慮脫水沒(méi)有脫干凈及切片未二甲苯透明。

12、免疫組化結(jié)果好壞判斷：目的蛋白成黃色棕色細(xì)沙或細(xì)顆粒狀，蛋白顯色定位正確，核還是漿。背景無(wú)色，細(xì)胞核藍(lán)色。