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人粘蛋白5AC(MUC5AC) ELISA 試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 更新時(shí)間:2024-09-08

簡(jiǎn)要描述:免費(fèi)代測(cè) 售后無(wú)憂(yōu) 可按照要求定制
方便快捷 用途廣泛
特異性強(qiáng) 重復(fù)性好 靈敏度高
人粘蛋白5AC(MUC5AC) ELISA 試劑盒

產(chǎn)品詳情



人粘蛋白5AC(MUC5AC) ELISA 試劑盒



檢測(cè)前準(zhǔn)備工作:

1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過(guò)50℃,使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫)。當(dāng)日使用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘,加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為8000pg/mL)。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诜磻?yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類(lèi)推。 

4. 酶結(jié)合物工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。

當(dāng)日使用。


試劑盒組成


名稱(chēng)

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

無(wú)

樣本xi釋液

6mL

3mL

無(wú)

檢測(cè)抗體

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

無(wú)

底物B

6mL

3mL

無(wú)

終止液

6mL

3mL

無(wú)

封板膜

2張

2張

無(wú)

說(shuō)明書(shū)

1份

1份

無(wú)

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無(wú)

 

人粘蛋白5AC(MUC5AC) ELISA 試劑盒


實(shí)驗(yàn)步驟

1. 準(zhǔn)備:準(zhǔn)備好所有試劑、材料和器具。

2. 溫育:將包被有特異性抗體的酶標(biāo)板放入37℃溫箱中溫育30分鐘。

3. 加樣:分別向各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本,輕輕混勻。

4. 溫育:將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

5. 洗滌:清洗酶標(biāo)板,除去未結(jié)合的抗原抗體。

6. 加酶標(biāo)二抗:向各孔中加入酶標(biāo)二抗,輕輕混勻。

7. 溫育:將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

8. 洗滌:清洗酶標(biāo)板,除去未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。

9. 加底物溶液:向各孔中加入底物溶液,輕輕混勻。

10. 顯色:將酶標(biāo)板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育15分鐘。

11. 終止:向各孔中加入終止液,混勻。

12. 測(cè)量:在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的光密度值(OD值)。

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洗板方法

1.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5次。

2.自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。

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試劑盒會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法:

1. 加入反應(yīng)終止液后,沒(méi)有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶標(biāo)記物。

解決辦法:請(qǐng)按照操作步驟進(jìn)行。

b.原因:試劑盒內(nèi)容物未能充分回。

解決辦法:確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進(jìn)行操作。

c.原因:室溫太低。

解決辦法:若室溫太低(<19℃),請(qǐng)于操作步驟4,適當(dāng)延長(zhǎng)溫育時(shí)間。

d.原因:未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法: 請(qǐng)用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。

e.原因:試劑盒已過(guò)有效期限。

解決辦法:請(qǐng)更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳,或是平行性不好。

a.原因:溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法: 請(qǐng)確認(rèn)溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。

b.原因:操作時(shí)間拖太久。

解決辦法:請(qǐng)?jiān)诜椒ㄊ炀毢笤龠M(jìn)行操作。

c.原因:微孔間相互污染。

解決辦法: 加樣品時(shí),請(qǐng)小心勿濺出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:標(biāo)準(zhǔn)品或酶標(biāo)記物所加入的量不一致。

解決辦法:請(qǐng)使用已校正過(guò)的移液槍?zhuān)⒋_保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因:添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法:加樣品或試劑時(shí),吸頭請(qǐng)勿接觸微孔。

f.原因:洗板過(guò)程發(fā)生問(wèn)題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進(jìn)行下一步驟)。

解決辦法:請(qǐng)隨時(shí)監(jiān)控洗板機(jī)洗板過(guò)程,洗完后立即進(jìn)行下一步驟。

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