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人早期生長應答蛋白4(EGR4) ELISA 試劑盒

  • 產品型號:
  • 更新時間:2024-09-08

簡要描述:免費代測 售后無憂 可按照要求定制
方便快捷 用途廣泛
特異性強 重復性好 靈敏度高
人早期生長應答蛋白4(EGR4) ELISA 試劑盒

產品詳情

人早期生長應答蛋白4(EGR4) ELISA 試劑盒



檢測前準備工作:

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正常現(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結晶溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應為室溫)。當日使用。

3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘,加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為8000pg/mL)。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋(注:不要直接在反應孔中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品:取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。 

4. 酶結合物工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。

當日使用。


試劑盒組成


名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本xi釋液

6mL

3mL

檢測抗體

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

 

人早期生長應答蛋白4(EGR4) ELISA 試劑盒


實驗步驟

1. 準備:準備好所有試劑、材料和器具。

2. 溫育:將包被有特異性抗體的酶標板放入37℃溫箱中溫育30分鐘。

3. 加樣:分別向各孔中加入標準品、待測樣本,輕輕混勻。

4. 溫育:將酶標板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

5. 洗滌:清洗酶標板,除去未結合的抗原抗體。

6. 加酶標二抗:向各孔中加入酶標二抗,輕輕混勻。

7. 溫育:將酶標板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育30分鐘。

8. 洗滌:清洗酶標板,除去未結合的酶標二抗。

9. 加底物溶液:向各孔中加入底物溶液,輕輕混勻。

10. 顯色:將酶標板放入37℃溫箱中繼續(xù)溫育15分鐘。

11. 終止:向各孔中加入終止液,混勻。

12. 測量:在450nm波長下測量各孔的光密度值(OD值)。

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洗板方法

1.手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5次。

2.自動洗板機:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。

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試劑盒會出現(xiàn)的問題及解決辦法:

1. 加入反應終止液后,沒有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶標記物。

解決辦法:請按照操作步驟進行。

b.原因:試劑盒內容物未能充分回。

解決辦法:確定試劑盒內容物回溫后再進行操作。

c.原因:室溫太低。

解決辦法:若室溫太低(<19℃),請于操作步驟4,適當延長溫育時間。

d.原因:未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法: 請用試劑盒內所提供的清洗液清洗。

e.原因:試劑盒已過有效期限。

解決辦法:請更換成仍在有效期限內的試劑盒。

2. 標準曲線線性不佳,或是平行性不好。

a.原因:溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法: 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內)。

b.原因:操作時間拖太久。

解決辦法:請在方法熟練后再進行操作。

c.原因:微孔間相互污染。

解決辦法: 加樣品時,請小心勿濺出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:標準品或酶標記物所加入的量不一致。

解決辦法:請使用已校正過的移液槍,并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因:添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法:加樣品或試劑時,吸頭請勿接觸微孔。

f.原因:洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)。

解決辦法:請隨時監(jiān)控洗板機洗板過程,洗完后立即進行下一步驟。

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