猴褪黑素(MT)酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒

檢測前準(zhǔn)備工作:

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘，加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為8000pg/mL）。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。 

4. 生物su化抗體工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物su化抗體稀釋液稀釋濃縮生物su化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5. 酶結(jié)合物工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。

當(dāng)日使用。

實驗步驟

1. 準(zhǔn)備試劑盒：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘以上，使試劑盒恢復(fù)至室溫。

2. 加樣：分別向各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和空白孔，每孔加入50μl。

3. 孵育：用封板膠紙封住反應(yīng)孔，輕輕振蕩混勻，37℃孵育1小時。

4. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

5. 加酶標(biāo)二抗：每孔加入50μl酶標(biāo)二抗溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育30分鐘。

6. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

7. 加底物：每孔加入50μl底物溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育15-20分鐘。

8. 終止反應(yīng)：每孔加入50μl終止液，輕輕振蕩混勻。

9. 讀數(shù)：用酶標(biāo)儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值。

結(jié)果判斷:

1. 每個標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

猴褪黑素(MT)酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒

注意事項

1. 試劑盒保存于2-8℃，切勿反復(fù)凍融或長時間保存于室溫。

2. 實驗前確保所有試劑均已恢復(fù)至室溫。

3. 加樣時注意避免產(chǎn)生氣泡。

4. 洗滌時要保證充分洗滌，避免殘留物影響實驗結(jié)果。

5. 底物溶液應(yīng)避光保存，避免長時間暴露于空氣中。

6. 酶標(biāo)儀應(yīng)使用450nm波長進行讀數(shù)，其他波長可能導(dǎo)致誤差。

7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考，不適用于臨床診斷和治療。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

科研產(chǎn)品合作單位：

吉林大學(xué)

浙江大學(xué)

農(nóng)業(yè)大學(xué)

華東理工大學(xué)生工學(xué)院

福建師范大學(xué)

浙江工業(yè)大學(xué)

北京化工大學(xué)

南通大學(xué)

同濟大學(xué)

華南理工大學(xué)

浙江工業(yè)大學(xué)

廣西大學(xué)

東華農(nóng)業(yè)大學(xué)

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